开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究或解决的问题
1.考察骨化三醇对PC-9/GR（吉非替尼耐药株）细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。
2.考察骨化三醇联合吉非替尼对PC-9/GR细胞增殖的影响，计算联合指数，并确定对细胞凋亡和细胞周期的影响。
3.观察骨化三醇，吉非替尼以及骨化三醇联合吉非替尼对PC-9/GR细胞上VDR表达以及细胞成球能力的影响。
二、采用的研究手段
1.不同浓度骨化三醇作用于PC-9/GR细胞不同时间对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响
取对数生长期PC-9/GR细胞制成单细胞悬液，以2times;102个/孔接种于96孔板中，每孔150mu;l，37℃、95%湿度、5% CO2条件下培养过夜。待细胞贴壁后分组处理：空白组（仅有培养基）；对照组（培养的细胞中不加任何干预药物）；不同浓度骨化三醇组（0、0.64、3.2、16、80、400、2000、10000nmol/L）；每组均设6个平行复孔。分别继续培养24h，48h和72h后，去掉培养基，每孔加入150mu;l 0.5% MTT，在细胞培养箱中继续培养约4h。小心吸弃MTT溶液，每孔加入150mu;l的DMSO，摇晃均匀，在570nm测定吸光度。以上实验重复3次。
取各组细胞，按每孔 3 times; 105 个细胞接种于6孔板，每组设3个复孔。培养48 h 后制备细胞悬液; 缓慢滴入375mu;L -20 ℃预冷的无水乙醇，1000 r·min－1 离心 5 min，弃去无水乙醇，用PBS洗2~3遍; 加入500 mu;L 含 50 mg·L－1 ＲNA 酶的PBS，37 ℃恒温培养箱内孵育30 min; 加入5 mu;L 1 g·L－ 1 碘化丙啶( propidium iodide，PI ) 染色液，冰上避光孵育15 min。用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布, 计算处于Ｇ０/Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２/Ｍ期的细胞所占比例。
取各组细胞，按每孔 3 times; 105个细胞接种于6 孔板中，每组设3个复孔。 培养72 h后制备细胞悬液; 1000 r·min－1 离心5 min，弃上清液; 将细胞沉淀加入1 times; 结合缓冲液 100 mu;L 重悬，平均分成3份，加入3个EP管中1个 EP 管加入 5 mu;L AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素( fluorescein isothiocyanate，FITC)，1个 EP 管中加 0. 4 mu;L 10 g·L－1 PI 染色液，另1个EP管加入 Annexin Ⅴ-FITC 和 PI，混匀后避光5 min; 每个EP管中加入 400 mu;L 1 times; binding buffer，用200~400目钢筛过滤，流式细胞术检测细胞凋亡率。
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
