中国药科大学本科生毕业论文（设计）开题报告姓名 宋芮 学号 14403911 专业 生物技术 指导教师 王旻课题名称 抗CD24嵌合抗体cG7融合MICA的体内外活性鉴定课题性质 radic;基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、拟研究或解决的问题：目前，肿瘤疾病的治疗手段多以放化疗居多，但是放化疗治疗效果并不十分理想，安全性差，复发率高等问题显著。
有研究发现，肿瘤细胞表面MHC-Ⅰ类链分子A（MHC class I-related chain molecules A, MICA）通过与NK细胞表面的NKG2D(natural killer cell receptor G2D)结合，从而促进NK细胞的细胞毒作用。
此机制在NK细胞介导的免疫调节过程起着至关重要的作用，但是当肿瘤细胞表面的MICA脱落则容易导致免疫逃逸的发生。
且研究显示，CD24在肝癌细胞上高表达，如Huh-7,BEL-7402上，CD24都有很高的表达水平。
因此，我们在实验室已有的抗CD24的单链抗体rG7s的基础上设计构建了嵌合抗体cG7。
为了弥补肿瘤细胞免疫逃逸的不足，我们拟将嵌合抗体cG7的Fc段末端用Linker连接上MICA分子，从而利用cG7靶向肝癌细胞上CD24分子的性质将MICA展示在肿瘤细胞的表面，通过MICA分子与NK细胞表面的NKG2D受体相互作用，活化NK细胞并募集NK细胞至肿瘤细胞附近，活化后的NK细胞通过释放IFN-gamma;和TNF-alpha;等细胞因子杀伤肿瘤细胞。
通过这样的设计来验证其体内外活性。
二、研究手段：1、NK细胞介导的细胞毒性检测我们拟将采用CytoTox96试剂盒进行非放射性细胞毒性检测，这是一种基于比色法的检测方法，可以定量测饿出乳酸脱氢酶（LDH）的水平。
LDH是一种比较稳定的胞质酶，会在细胞裂解时释放，当释放出的LDH分泌到培养基上清时，我们可以通过偶联的酶反应检测，在酶反应中，LDH可以使四唑盐(INT)转化为红色的甲赞(formazan)，而生成的红色甲赞的含量又与裂解的靶细胞数量成正比。
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