开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景
遗传密码扩充技术，是将非天然氨基酸通过特殊密码子（例如 UAG）添加到蛋白质链中的技术。在蛋白质表达过程中，氨酰tRNA合成酶使对应的tRNA氨酰化（携带上其对应的氨基酸）。氨酰化的tRNA对应于mRNA上特定密码子,把氨基酸送入核糖体内以添加到正在增长的肽链中。遗传密码扩充技术就是模拟上述过程,通过在生命活体内引入与非天然氨基酸对应的tRNA及tRNA合成酶,并使它们与特殊的密码子对应，从而将非天然氨基酸通过基因表达结合到蛋白质中。对于大肠杆菌的3个终止密码子，UAG（琥珀密码子）的使用最少，且在大肠杆菌中已发现能够抑制UAG的天然tRNA,而选用终止密码子UAG也不会对宿主造成明显的干扰。因此，通过将生物体中mRNA上任意一个遗传密码取代为UAG，就可以在蛋白质中相应位置插入非天然氨基酸。遗传密码扩充技术打破了生命体基因只编码天然氨基酸的限制,改变了蛋白质合成的传统思路，对基因进化及变异、新型蛋白质的合成与研究具有重要意义。
大肠杆菌等原核生物有RF1和RF2两种内源性释放因子，RF1识别终止密码子UAA和UAG，RF2识别终止密码子UAA和UGA。一般情况下，RF1与抑制性tRNA竞争结合UAG密码子，引起肽链和核糖体从mRNA上释放，使翻译终止。因此，这项技术的关键在于获得一对正交的氨酰tRNA合成酶/tRNA分子对，特异性识别UAG，利用其高特异性反应将非天然氨基酸定点引入蛋白质分子中。已有文献报道：原始细菌Methanococcusjannaschii(Mj)与酪氨酸对应的tRNA合成酶/tRNA分子对是较好的选择。然而，由于释放因子RF1的竞争作用，导致翻译提前终止，产生截短型蛋白，使其表达的效率大大降低。为了提高UAG处非天然氨基酸的表达效率，之前所做的研究大约有以下四个方向：
1.增加抑制性tRNA拷贝；
2.优化抑制性tRNA来增强Uaa-tRNA对EF-Tu的结合力；
3.强化的共表达质粒来提高aaRS表达量；
4.降低RF1与抑制性tRNA的竞争作用。
以上这些改进虽然有所成效，却不能同时表达含有三个以上框内琥珀密码子的目的蛋白。而为了消除RF1的竞争作用，最有效的方法是从大肠杆菌中彻底敲除RF1的编码基因prfA。但是有报道表明，对于大肠杆菌来说，RF1是生存所必需的，RF1缺失对菌株生长有致命性伤害。因此，在敲除基因prfA的同时，需要对另一个释放因子RF2的编码基因prfB进行改造，弥补RF1缺失造成的影响，提高非天然氨基酸的引入效率。
二、研究目的及意义
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
