复合益生菌治疗溃疡性结肠炎的体内作用的研究
1.前言
溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)是炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease，IBD)的一种，是直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病，以腹痛、腹泻、黏液便和血便为主要临床表现，其发病原因和致病机制至今还不明确，有研究者认为可能与免疫、遗传、肠道菌群失调有关[1]。目前无确切根治方案，临床以诱导缓解和继续维持缓解, 预防复发为治疗手段，然而对于急性期患者，即使用标准的维持治疗措施，仅能将一年内UC的复发率降为50％[2]，疗效也不能令人满意。尽管当前采用糖皮质激素、水杨酸制剂、免疫抑制剂以及新型生物制剂对UC进行治疗，取得了一定的效果，但其副作用较大，用药时间长且停药后病情容易复发，给患者带来了诸多不良影响。所以，人们迫切希望能找到一种安全有效，副作用小的治疗药物。
益生菌（Probiotics）是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。在1965年，Lilly和Stillwell首先提出益生菌这一说法。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。当UC患者肠道内存在菌群失调，正常细菌数量减少时，若给患者补充正常细菌即益生菌，使肠道内菌群失调得到纠正，可使病情得到缓解[3]。近年来，益生菌作为安全有效，无副作用的治疗剂激起了人们广泛的研究兴趣。大量关于应用益生菌制剂治疗UC及其并发症的实验和临床研究正在进行。本研究利用复合益生菌治疗DSS诱导溃疡性结肠炎的体内效果，为益生菌治疗或辅助治疗 UC 提供新的理论依据。
2. 材料与方法
2.1 SD大鼠急慢性溃疡性结肠炎模型的建立
将60只健康SD大鼠按照随机原则分为三组。将大鼠禁食24小时后,用10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，一次性将TNBS(100mg/kg体重)和100%乙醇以1:1(V:V)混合后，把混合溶液lml用橡胶输液管缓慢注入距肛门约8cm的肠腔内然后立即提起大鼠尾巴倒置8分钟，防止药液倒流。自第9天起收集三组大鼠的粪便，注意观察其性状，再做大便隐血试验，观察有无便血及其严重程度，评估结肠炎严重程度。注意观察各组大鼠的一般状态，包括毛色、精神、食欲、活动等情况有无改变。3周后将三组全部大鼠禁食ld，以10%的水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，解剖大鼠，游离结肠和远端回肠，分别于结肠上段(距盲肠1cm)、结肠中段、结肠末端(距肛门约1cm)处各剪取结肠数段，冷生理盐水冲洗肠内污染物3-4次，4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察其组织病理学改变。
2.2 疾病活动指数（DAI）评分测量
每日测定大鼠体质量，观察大鼠大便性状并进行评分，得出每只大鼠的DAI [4]。该评分考虑了三个参数：百分比体重下降、粪便性状和直肠出血。评分标准如表1。
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