开题报告内容：
一、课题解决的问题
硬化蛋白(Sclerostin,SOST)主要由骨细胞特异性表达,是骨形成的负性调节因子。甲状旁腺激素和雌激素抑制SOST基因表达,转录因子Osterix、Runx2和Mef2c促进SOST基因表达,而转录因子Sirt1负调控SOST表达。此外,SOST基因表达还受DNA甲基化和microRNA等表观遗传学调控。SOST基因突变可引起骨硬缩症和Van Buchem病,与骨质疏松症相关联。Wnt和BMP是骨代谢调节的两个重要信号途径,SOST可通过结合BMP的Ⅰ型或Ⅱ型受体和Wnt的共受体LRP5/6分别抑制BMP和Wnt信号途径来调控成骨细胞分化和骨形成。抑制SOST为骨质疏松症的治疗提供了新的途径。
肝癌由于其发病率和病死率高而成为我国癌症的第二号杀手,我国每年死于肝癌的人数约占全世界的43%,如何采用不同的诊疗手段来提高肝癌的治愈率已成为各国医学界共同关注和研究的问题。由于细胞膜表面受体往往是新药研发的重要靶点和提示,所以通过分子生物学和细胞生物学手段鉴定对于肝癌发生有重要作用的新受体是进一步研发抗肝癌药物的基础。
本课题拟构建筛选的LRP6能起到调控Wnt信号通路的作用，而在肝癌细胞系HepG2和 Huh-7中，LRP6的表达水平要显著高于正常肝细胞系 LO-2 中的表达水平，更有学者于2015年提出LRP6/Wnt通路可能是肝细胞肿瘤的潜在治疗靶点。
因此我们通过电穿孔方法转染CHO K1细胞，提高转染效率，并筛选出高效表达的细胞株，可以使我们更深入的研究LRP6，建立hsost的细胞模型，并用于抗体功能的筛选。
二、研究方法和技术路线
本实验通过电穿孔转染法把LRP6真核质粒转入CHO K1细胞，利用流式细胞仪检测LRP6蛋白，并进行亚克隆筛选出高表达的稳定细胞株。
该方案的特点在于采用真核表达细胞，可正确折叠及糖基化.流式细胞检测具有灵敏度高。初步确定共分六个步骤完成本设计。
1.细胞复苏
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