研究背景：
胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤疾病，同时它也是预后极差的恶性肿瘤之一，患者的 5 年生存率低于5%。在男性和女性死亡病例的主要原因中，胰腺癌排名分别为第八和第九。近年来，我国胰腺癌发病率呈现上升趋势，其中农村地区上升明显，城市地区上升速度略缓，到 2016 年总体上升趋势虽然有所减缓，但仍是我国目前临床主要癌症之一[1]。研究报告表明，K-Ras基因点突变与胰腺癌存在着密切关系, K-Ras在胰腺癌中的突变率约为90%，其12号密码子是发生突变的热点位置，因此，检测该点突变对胰腺癌的诊断、预后及监测等都具有重要的临床价值[2]。
Ras基因家族中，与人类肿瘤相关的基因有三种H-Ras、K-Ras以及N-Ras，它们分别定位在11、12和1号染色体上。K-Ras基因因编码21kD的Ras蛋白又名p21基因。在Ras基因中，K-Ras基因对人类癌症影响最大，K-Ras基因是细胞内信号传导途径中的下游区的一种信号传导蛋白，对细胞的生长存活和分化等功能具有极其重要的影响。它就好像分子开关：当其正常时能控制调控细胞生长的路径；发生异常时，则导致细胞持续生长，并阻止细胞自我毁灭[3]。她参与细胞内的信号传递，当K-Ras基因突变时，该基因永久活化，不能产生正常的Ras蛋白，使细胞内信号传导紊乱，从而使细胞增殖失控而癌变[4]。
K-Ras基因可以是正常状态（称为野生型）或异常状态（突变型）。正常生理情况下，在细胞受到外界刺激后激活EGFR等信号通路时，野生型的K-Ras基因被活性EGFR等酪氨酸激酶磷酸化后短暂活化，被激活活化后的K-Ras可以激活该信号通路中的下游信号蛋白，之后K-Ras迅速失活[5-8]。突变型K-Ras蛋白导致蛋白功能异常，在无EGFR活化信号刺激下仍处于激活状态，其功能状态不可控，导致肿瘤的持续增殖等。
由此可见，K-Ras基因检测（K-Ras,p21）在临床研究中具有极其重要的意义，通过检测K-Ras基因突变以便深入了解癌基因的情况、了解各种癌症的发展预后，以及它的检测已成为放化疗疗效的重要指标。这里，我们的主要方向是通过探讨K-Ras基因第12密码子突变，对K-Ras突变体进行真核表达载体的构建，使其在胰腺细胞中的进行表达,并对其表达产物进行检测以及探测其与胰腺癌的鉴别、诊断所存在的关系并从中提供基础性的依据。
研究手段：
本文采用的是由实验室中培育好的胰腺癌细胞（Panc-1）中提取信使RNA（mRNA），提取好的mRNA通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，之后通过PCR反应，从而得到K-RasG12D基因，通过一定的手段，构建好重组表达载体pcDNA3.1( )-K-rasG12D，之后对连接产物进行转染，并对其的表达产物进行检测，一般我们采用的是Western Blot检测，通过对蛋白的检测，我们可以从中得到一系列因K-Ras基因突变导致表达产物变化而引起胰腺疾病的发生的一系列变化，从而能够在鉴别、诊断、治疗肿瘤方面提供一些基础性依据。
文献综述：
摘要：
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