重组钙释放激活的钙通道抑制剂蜘蛛毒素蛋白表达的研究
一、任务书:
实验目的:
1、构建大肠杆菌的表达质粒,表达并且纯化目的蛋白。2、鉴定纯化得到的重组蛋白是否具有和天然蛋白相同的结构。3、如果重组蛋白没有正确的折叠,通过体外氧化折叠的方法得到具有正确构象的重组蛋白。
基本方法:
1、感受态细胞的制备2、质粒的转化3、融合蛋白的诱导表达4、超声破碎细胞5、谷胱甘肽(GST)亲和层析6、SDS-PAGE电泳7、 HPLC 纯化及鉴定
二、拟研究或解决的问题:
细胞内钙离子(Ca2 )作为第二信使,对细胞功能的调控极为重要,如基因的转录,激素和神经递质的释放,以及细胞生长周期的转化和凋亡。
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