一、研究背景
在肿瘤免疫耐受中，发现了表达在T细胞上的程序性死亡受体（Programmed cell Death-1,PD-1）和肿瘤细胞表面的程序性死亡受体的配体（Programmed Death-1 Ligand-1，PD-L1）。PD-L1是由CD274基因编码的，分子量为40kDa的1型膜蛋白【1】。PD-L1通过与PD-1的结合使得特异性T细胞对肿瘤细胞具有靶向作用。
B7家族(免疫球蛋白超家族)在共刺激信号中具有非常重要的地位，其诱导T细胞进行活化分化。B7家族成员B7-1和B7-2作为经典的协同刺激分子,已得到广泛的研究。近几年该家族新成员不断被发现,如PD-L1,PD-L2等【2】。PD-L1是免疫调控的负性调节因子，通过与PD-1结合产生负性调控信号，介导T细胞的凋亡机制，抑制T细胞活化，从而促进肿瘤细胞增殖。PD-L1可诱导肿瘤特异性CD28 T细胞凋亡，这种免疫抑制途径可以促进肿瘤的增殖、克隆和侵袭【3】。PD-L1和肿瘤的耐药性相关，对于诱导肿瘤凋亡的抑制剂具有抵抗效应【4】。PD-L1表达越高，肿瘤恶化程度越大，因而PD-L1可指示肿瘤患者的预后【5】。PD-1/PD-L1通路是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一，通过共刺激信号通路抑制肿瘤特异性T细胞的活化、细胞因子的作用，并可形成肿瘤抑制的微环境【6】。有关文献表明，对于CD4 T细胞和CD8 T细胞而言,PD-L1/PD-1途径能明显抑制其活化,在下调T细胞活化和增殖的同时,也明显下调了IFN-gamma;的分泌水平【7】。PD-L1已成为肿瘤免疫治疗的新靶点，可利用PD-L1研究肿瘤免疫逃逸机制和免疫耐受，PD-1和PD-L1的抑制剂或者PD-L1联合抑制剂在肿瘤免疫治疗中也非常重要【8】。
PD-L1抗体主要阻断PD-L1与其受体PD-1相结合，从而解除T细胞活性受抑制的状态，促进活化T细胞对肿瘤细胞的攻击，但PD-L1抗体能阻断PD-L1与PD-1、CD80结合，却不能阻断PD-1与PD-L2的结合【9】。目前从临床研究中观察到，PD-L1抗体似乎在不良反应上更占优势。临床前模型中已证实PD-1抗体与PD-L1抗体的联合应用比单用有更好的疗效【10】。综上所述，PD-L1单克隆抗体具有很好的研究前景，本课题为后续的PD-L1单克隆抗体的研究提供了一定基础。
二、研究问题
本课题主要通过杂交瘤细胞技术，用抗原刺激B细胞后，获得可稳定分泌PD-L1的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞SP20细胞进行融合，获得可以稳定表达PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞，注入模式动物，并诱导其在动物模型体内进行表达PD-L1单克隆抗体，通过提取分离技术获得纯化的PD-L1单克隆抗体。主要研究方向为利用实验室前期已获得的可能分泌PD-L1单克隆抗体的杂交瘤细胞，通过腹水法大量制备单克隆抗体，并通过Protein A柱对产物进行纯化，经超滤浓缩后得到目的条带单一且浓度较高的最终产物，通过后续一系列实验对此产物进行鉴定及初步的生物学功能研究。
1. 活化杂交瘤细胞
从冻存管中活化已经制备好的杂交瘤细胞，将冻存于液氮罐中的杂交瘤细胞复苏，经组织培养瓶细胞传代培养。
2. 注入模式动物
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