开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
开题报告内容：
一、研究背景
靶向肿瘤细胞的单抗药物其重要的药理机制之一是介导抗体依赖细胞毒作用(antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC)。研究发现降低或缺乏盐藻糖基化修饰的抗体介导ADCC效应的能力较正常盐藻糖基化修饰抗体显著提高。在中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary cells ,CHO cells）中，FUT8基因编码 alpha;-1，6 岩藻糖转移酶。通过敲除FUT8基因，CHO 细胞可以表达岩藻糖基化修饰缺失的抗体，这种抗体相对于岩藻糖基化修饰的抗体可以在机体内更大化地发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，提高抗体药物的临床疗效。
二．研究目的及意义
本课题组前期通过敲除中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary cells ，CHO cells）中FUT8 基因（alpha;-1，6 岩藻糖转移酶），从CHO 细胞中表达出岩藻糖基化修饰缺失的抗体，并对此抗体进行分离纯化。这学期，本课题组拟通过PBMC细胞介导的细胞毒性检测，检验低岩藻糖抗体与正常表达抗体的活性差异度，同时探索出在此类ADCC检验中：效应细胞/靶细胞数量的最佳比例，抗体发挥作用的最适浓度，培养基中FBS（胎牛血清）的含量，效应细胞靶细胞抗体的孵育时间等问题。
三、研究方案
1．提取PBMC（外周血单个核细胞）：取新鲜血液，静置取上层血浆及交接面细胞，然后加入淋巴细胞分离液，800 g，30 min离心取中间一层较致密的白膜，之后进行加入培养基离心350 g，8 min清洗后得到PBMC细胞，最后加入合适培养基稀释备用。
2．PBMC细胞介导的细胞毒性检测：非放射性细胞毒性检测是基于比色法的检测方法，测定乳酸脱氢酶（LDH）。LDH是一种稳定的胞质酶，在细胞裂解时会释放出来，释放出来的LDH在培养基上清中，通过30min偶联的酶反应来检测。在酶反应中LDH可使一种四唑盐（INT)转化为红色的甲臜（foemazan）。生成的红色产物的量与裂解的细胞数成正比。可见光吸光值数据可以用标准的96孔读板计收集。
此次实验中的效应细胞为PBMC，靶细胞为SK-BR-3(抗体受体高表达乳腺癌细胞)，抗体为低岩藻糖抗体和正常抗体。
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