开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景
抗原的交叉递呈是指外源性抗原进入MHCI类分子处理途径的现象，能够特异性启动细胞毒T细胞应答，构成防御病毒、肿瘤和胞外病原微生物的重要一环，而且还参与维持机体免疫耐受的形成，与多种自身免疫性疾病的发病机制有关。树突状细胞抗原交叉递呈被认为是机体进行外源性抗原交叉递呈的主要途径。研究发现，小鼠体内的CD8 DCs亚群和人体内的CD141 DCs亚群均能高效的进行抗原的交叉递呈，这两种细胞表面均有C型凝集素受体CLEC9A表达。CLEC9A（C型凝集素结构域家族9成员），也被称为DNGR-1（树突状细胞自然杀伤细胞凝集素组受体1），是一个241个氨基酸的单通的II型跨膜蛋白，含有一个C型凝集素结构域，属于CTL/CTLD家族。表达髓系细胞、脑、脾脏、胸腺、CLEC9A是V组的C型凝集素样受体作为活化受体。CLEC9A可以特异性的介导抗原的交叉递呈，将外源性抗原通过MHCI分子呈递给CD8 T细胞，从而激活CD8 细胞的细胞毒作用。
二、研究目的及意义
本课题拟对CLEC9A胞外区蛋白进行分析及设计，完成突变体蛋白的构建、表达和纯化，以得到纯度较高的产物，为筛选靶向CLEC9A受体的靶向肽提供纯度较高的抗原。为研发选择性靶向树突细胞的疫苗提供基础。
三、研究方案
(1)CLEC9A胞外区蛋白的选取和目的基因的设计：a)通过相关文献调研（从CNKI、NCBI、Elsevier等数据库调研相关文献），了解CLEC9A受体的作用及机制；b)利用http://www.uniprot.org/在线软件，对CLEC9A胞外，跨膜及胞内区进行区分，并对其性质进行分析。选定胞外区氨基酸序列。c)利用http://web.expasy.org/protparam/在线软件，对选定的CLEC9A胞外区氨基酸序列的等电点，分子质量，疏水性，氨基酸组成和稳定系数进行分析。
d)利用DNAWORK在线软件，以大肠杆菌常用密码子为基础，对CLEC9A胞外区氨基酸序列进行密码子的优化。(2)pET28a-CLEC9A的构建与表达：a)将优化好的cDNA进行合成，并将其克隆到pET28a表达载体。b)将pET28a-CLEC9A转化BL21DE3大肠杆菌，并对表达条件进行摸索。
c)对CLEC9A蛋白的表达量进行优化，并大规模发酵。
(3)CLEC9A的分离纯化：
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