开题报告内容：
- 研究的目的及意义
蛋白质免疫印迹（protein immunoblot,或 Western blot）是一种广泛应用于广泛应用于检测细胞或组织蛋白质表达及蛋白质翻译后修饰的方法。而类风湿性关节炎患者的滑膜组织会产生病理改变，滑膜内有大量T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞呈弥漫性和局限性浸润，这些细胞释放多种炎症因子，诱导滑膜组织的慢性炎症。通过利用Western blot检测其中关键因子，可进而帮助理解类风湿性关节炎的病理作用和发病机理。
- 拟研究或解决的问题
在使用蛋白质免疫印迹检测类风湿性关节炎大鼠滑膜样品关键因子的过程中，条带不够清晰，有的因子检测结果不清楚。本课题旨在是通过优化WB反应的条件，调整参数，使条带更清晰，结果更有说服力。
- 采用的研究手段
本研究将以类风湿性关节炎大鼠为实验对象，分离其滑膜组织，提取蛋白质样品，进行Western blot分析。在实验过程中优化步骤中的实验条件和参数，以得到更清晰的条带。
三、文献综述
摘要
蛋白质免疫印迹（protein immunoblot,或 Western blot）是一种广泛应用于广泛应用于检测细胞或组织蛋白质表达及蛋白质翻译后修饰的方法。[3]本课题旨在通过该方法检测类风湿性关节炎大鼠滑膜样品中的关键分子，并优化和和检测该方法的适用性。
实验过程
大鼠模型造模成功后。分别取试验组和对照组大鼠以颈椎脱臼法处死，迅速剥离膝关节皮肤，沿膝关节后韧带处打开关节囊，小心地剥离滑膜，冰盐水冲洗掉多余的血液，将组织标本用于后续Western blot验证。迅速置于液氮中保存。将液氮冻存的滑膜组织样品在液氮中研磨成粉末，用裂解液裂解组织，提取样品总蛋白质，进行Western blot分析。先进行SDS-PAGE分离，然后采用半干法将蛋白转移至PVDF膜，经过含5%脱脂奶粉TBS封闭 1 h后，加入1∶500~1∶1000一抗4℃摇动反应过夜， 再进行二抗孵育，ECL化学发光检测，对比灰度值。
优化思路
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