课题名称 基于噬菌体展示技术的中药有效成分靶点蛋白的筛选课题性质 radic; 基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、课题拟研究的问题本课题旨在采用噬菌体展示技术从噬菌体随机肽库中筛选出能与中药有效成分特异性结合的肽链，并找出其潜在的靶点蛋白，探索其可能的作用机制，为深入研究中药的药理或毒理机制提供更可靠的信息。
用自行构建的噬菌体展示随机十五肽库和购买的随机十二肽库作为筛选库，通过吸附-洗脱-扩增等四轮淘选过程，对回收的噬菌体进行滴度测定，并通过噬菌体ELISA实验来测定噬菌体与靶分子的亲和力，从而筛选到亲和力较高的多肽克隆，将其送去测序，得到一系列特异性的多肽序列，通过检索已登记蛋白质，找出中药有效成分在体内的潜在靶点蛋白，并通过BIOCORE验证中药分子与靶蛋白之间的作用力，分析其可能作用机制。
二、课题研究手段1.天花粉蛋白靶点蛋白的筛选以自行构建的十五肽噬菌体展示文库和购买的随机十二肽库为筛选文库，将天花粉蛋白包被后，以BSA封闭，加入文库进行吸附-洗脱-扩增的经典生物淘洗后，获得与靶分子结合的噬菌体克隆，测定每轮洗脱的噬菌体滴度，ELISA法测定噬菌体与靶分子的亲和力，对获得的高亲和力噬菌体进行DNA提取，测定插入的外源DNA序列，得到一系列多肽序列，这些序列即为潜在的与天花粉蛋白特异性结合的多肽。
2. 士的宁靶点蛋白的筛选用随机十五肽库对盐酸士的宁进行筛选。
由于士的宁为中药小分子，无法进行靶分子包被，故采用悬浊液法进行噬菌体筛选。
通过吸附-洗脱-扩增的经典生物淘洗，采用离心法将噬菌体与中药成分分离。
对每轮洗脱与投入的噬菌体分别进行滴度测定，以确定每轮噬菌体的回收率。
并通过细胞毒干扰实验与渗透性影响实验分别来进一步筛选与士的宁具有特异性结合的噬菌体。
对筛选的序列进行DNA测序，以获得具有同源性的潜在靶点蛋白。
三、文献综述1.噬菌体展示技术的基本原理Smith于1985年创建了噬菌体展示技术（phage display technology），这项技术于20世纪90年代发展起来并得到广泛应用。
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