PMP柱前衍生化高效液相色谱法分析脉络宁中单糖的组成
脉络宁注射液是由石斛、金银花、玄参和牛膝组成，在著名医方四妙勇安汤的基础上,以中医理论为指导,采用中西医结合方法研究而成的中药复方注射剂。具有养阴清热、补益肝肾、活血化瘀的功效,临床上主要用于治疗血栓闭塞性脉管炎，静脉血栓形成，动脉硬化性闭塞症，脑血栓形成及后遗症等。由于在临床上的广泛应用，脉络宁的销售市场一直非常好。可是作为一种中药注射剂，脉络宁也不可避免的面临着安全性的问题。特别是近年国家药监局对中药注射剂的安全性要求增高，脉络宁也不得不面临着安全性再验证的问题。
作为传统中药，脉络宁的各种成分以及其有效成分都没有得到充分的了解，在其生产过程中也很难控制其质量。在这种情况下，将其以注射剂的形式使用，必定会产生明显的不良反应。临床上大量的不良反应报告也验证了这一点。
经初步分析得知脉络宁注射液中含有糖类、有机酸类、萜类、黄酮类、香豆素类等成分。对其所含的化学成分的测定表明脉络宁注射液中的糖类含量占了35%，是含量最多的类物质。所以对脉络宁注射液中单糖组成的分析具有非常重要的意义。对脉络宁注射液中成分的分析能使人们更好地了解其中的成分并确定其有效成分，这样就可以保留其有效成分而除去无效的成分，从而充分发挥其治疗作用并大大减少不良反应的发生。所以分析脉络宁注射液中的组成成分具有非常重要的意义。而糖类是其中含量最多的物质，所以对其中糖类物质组成的分析是非常重要的。
由于单糖的极性较强，结构相近，且缺乏光学活性，所以为了改善其分离选择性和提高其检测灵敏度，常常将多糖水解后采用柱前或柱后衍生化色谱法分离和检测。柱前衍生化方法是使糖类物质带上紫外或荧光基团，用HPLC进行分离，用紫外或荧光检测，这种方法具有分离效率高、分析时间短、进样量少、检测限低及多模式等特点。用于糖类衍生的试剂有2氨基苯甲酸、对甲氧基苯胺、2氨基吡啶、6氨基喹啉、对硝基苯甲酰氯和PMP(1苯基3甲基5吡唑啉酮)等。其中PMP与糖类物质衍生时反应条件温和，产物无立体异构，紫外检测灵敏度较高。两分子PMP与分子单糖缩合，生成的衍生物与各单糖的定量关系明确，线性关系良好。PMP柱前衍生化高效液相色谱法反应条件较温和，产物无立体异构，紫外检测灵敏度较高，故得到较为广泛的应用。
用PMP柱前衍生化高效液相色谱法分析脉络宁中单糖的组成的基本原理是用PMP衍生化各种单糖的标准品作为对照，然后在脉络宁中加入PMP使脉络宁中的单糖也产生衍生化，将衍生化后的样品和标准品进行高效液相色谱分析，比较两者的色谱图，分析出脉络宁样品中单糖的组成和含量。
PMP作为常用的衍生化试剂，其参与的衍生化反应通常是将糖类物质溶解在NaOH溶液中，反应结束后用酸中和所产生的盐虽然不影响HPLC的检测及分析，但会降低质谱检测的灵敏度。而且由于质谱和液相色谱仪对所用的试剂的纯度要求很高，只能用分析纯的NaOH溶液，成本就会比较高。用氨水替代NaOH溶液，反应后氨水可以比较方便地除去，这样不仅简化了衍生化反应的后处理过程，而且不影响衍生物的质谱分析，省去了质谱分析前的脱盐处理过程，成本也比较低，所以现在多用氨水替代NaOH溶液。
经过研究发现，最佳的衍生化条件为用氨水取代NaOH作溶液，最佳反应时间为30min，最佳反应温度为70℃，最佳摩尔比为5：1。
柱前衍生化需要使用过量的衍生试剂以达到衍生化完全的目的，但必须在样品进入HPLC之前除去过量的衍生试剂，以清除衍生试剂的干扰，延长色谱柱的使用寿命。分别比较各种常用有机萃取剂去除杂质的效果(用PMP剩余量表示)和对衍生产物的回收率(用Sugar-PMP的回收率表示)，结果证明氯仿在这两方面的作用是最佳的。所以多用氯仿来作为萃取剂除去多余的衍生试剂。
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