珍稀药用植物金线莲种特异性分子标记开发研究
摘要:本文首先从金线莲的分布、应用价值、原植物来源、市场上的金线莲种类以及现在金线莲市场出现的问题等方面进行概述。为了较好的解决目前金线莲市场出现的以次充好,以假乱真的问题,需要开发一种能够快速鉴别金线莲种质资源的分子标记。本文就目前已有的三类DNA分子标记进行了简要的概述,较为详细介绍了SCoT分子标记和SCAR分子标记。与传统的分子标记相比,SCAR标记在种内或种间水平用于植物鉴定时,已被证明稳定性更高,成本较低,引物筛选的过程更简单,结果的可靠性更高,更适合大量的样本分析,因此本研究的目的是在SCoT分子标记的基础上,开发出金线莲种特异性的SCAR分子标记,为金线莲种质资源的快速鉴定提供一个工具,减少金线莲市场的以假乱真、以次充好的乱象,规范金线莲市场。
关键词:金线莲;分子标记;SCoT标记;SCAR标记
一、文献综述
(一)金线莲概况
金线莲来源于兰科开唇兰属(Anoectochilus Bl.),为多年生草本植物。其主要生长在海拔50-1600米常绿阔叶林下或者沟谷阴湿地带,喜阴湿、凉爽、弱光的环境,主要分布于中国、日本、泰国、越南、印度等国,在我国浙江、广东、广西、福建、云南、海南等地区均有分布。金线莲是一种珍稀的药用植物,全草可入药,国内外的各项研究表明,植株体内含有黄酮、生物碱、氨基酸、多糖、金线莲苷及免疫蛋白等多种有效成分,具有清热解毒、退风祛湿、凉血平肝、降血糖、镇痛等药效,对肿瘤、糖尿病、肝炎等多种疑难病症均有较好的疗效,因此金线莲在民间被称为“百药之王”、“金草”、“神药”[1-5]。除了有重要的药用价值外,金线莲富含维生素C及钙、磷、钠、钾、镁、铁、锰、锌、铜等元素,又可作为营养保健食品,在市场上广受人们的喜爱。与此同时,金线莲还有较高的观赏价值,可作为盆景、盆花等供人欣赏[6]。
目前,学者们通过相关考证,已接受金线莲作为开唇兰属民间药材的俗名。但对金线莲原植物的来源,仍存在较大的争议。主要的说法有三种:孔祥海[7]等人认为金线莲就是花叶开唇兰(Anoectochilus roxburghii( Wall.) Lindl);在《新华本草纲要》[8]中,则记载金线莲的原植物为花叶开唇兰(Anoectochilus roxburghii( Wall.) Lindl)和台湾金线莲(Anoectochilus formosanus Hayata);而陈泽宇[9]等人认为,金线莲的原植物有三种,除上述两种外,还应该包括高雄金线莲(Anoectochilus koshunensis Hayata)。郑丽香[10]通过考证,发现在台湾习惯以台湾银线兰(A. formosanus)作为金线莲的原植物,而由于大陆不产台湾银线兰,所以在大陆常把金线兰(又称花叶开唇兰、金丝草、金线莲,A. roxburghii)作为金线莲的原植物。
目前,在市场上所谓的金线莲药材大多来源于福建金线莲(又名花叶开唇兰)、台湾金线莲(又名台湾银线兰)和滇越金线莲(又名滇越金线兰,Anoectochilus chapaensis Gagnep)。由于它们都为开唇兰属植物,形态较为相似,经常将这三者混淆。不同地区金线莲种质资源品质不同,何淑敏[11]等人对13个来源于不同地区的金线莲种质进行相关功能成分(总黄酮、多糖和醇溶性浸出物等)含量的测定,发现具有较高利用价值的金线莲品种为福建大叶金线莲、台湾金线莲、湖南郴州金线莲和云南大圆叶金线莲,他们的市场推广前景较为广阔。金线莲的自然繁殖率较低,野生数量稀少。近年来,由于人类对野生金线莲大量地采挖以及对其生存环境的破坏,野生金线莲资源逐渐枯竭。因此,为了更好保护和利用金线莲野生资源,人们将金线莲引种驯化,并利用植物组织培养技术对金线莲进行快速繁殖,获得大量的金线莲资源,人工种植金线莲的产业不断扩大。但由于市场上的金线莲产品多为不同的企业自选自育的品种,金线莲市场种质资源混杂,经常会在不同产区出现同物异名或者同名异物的现象[12]。洪琳[13]等人调查发现,市场上的金线莲产品质量参差不齐,有些以次充好,有些真假掺半,产品中掺杂形态与金线莲极为相似的植物,如斑叶兰、血叶兰等。目前金线莲市场缺乏严格的量化质量检测标准,人们大多采用眼看、手摸和鼻闻等感官经验,这使得判断金线莲真伪优劣难度加大、准确性降低。用形态学方法对金线莲进行区分非常困难,因此,需要在分子水平上开发一种方便、快速、可控鉴定金线莲种质资源的方法。
(二)DNA分子标记概况
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