一、实验背景及拟解决的问题自20世纪80年代开始,基因重组技术开始应用于动物细胞,中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞表达组织型纤溶酶原激活物的实现,标志着哺乳动物细胞表达系统的建立。
随后,越来越多的外源基因被转染至哺乳动物细胞,一些有价值的蛋白得以实现表达,如凝血因子、干扰素、免疫球蛋白和单克隆抗体等。
近三十年时间内,单克隆抗体逐步成为众多生物药物中发展最快、最成功,应用最广泛的生物大分子药物之一。
目前,全球已有70余种单抗药物投入临床使用,在治疗癌症、自身免疫症和过敏性疾病等难症方面发挥重要作用。
近几年来,越来越多的高校和企业开始重视重组蛋白的新药的开发,而单克隆抗体(mAb)药物无疑是一个热点。
其发现和开发过程是一个复杂漫长的过程,最初的单抗发现通常是鉴别与特定药物靶标结合的几种mAb,但是最初发现的几种mAb通常不作为候选药物,药用mAb的挑选需要满足多个标准,包括良好的药代动力学和药效学特性;冻干或液体制剂保存时间长;可用标准的纯化方法从CHO细胞中纯化分离等。
为同时满足这些要求,往往会对其进行工程设计,每轮工程设计都会产生多种突变体,每轮工程改造后都需要大量蛋白验证表征,因此就需要在短时间内产出大量纯化蛋白。
传统的稳定转染的方法虽然应用广泛,发展完善,但其生产周期过长,无法满足快速生产的要求,而瞬时转染则可以在短时间内快速生成重组蛋白,现已成为关注的热点。
近几十年间,虽然瞬时转染技术也在不断发展,但是同一外源 DNA 分子稳定表达的产量要比瞬时表达高几十上百倍,这明显制约了其在药物研发阶段上的进一步应用发展。
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