患者血清中万古霉素血药浓度的HPLC方法建立
研究背景:
万古霉素属于糖肽抗生素,性状为白色粉末,英文名称为Vancomycin,分子式为C66H75Cl2N9O24,分子量为1449.25,密度为1.65g/立方厘米。最早由一个 EC Kornfeld 公司的传教士从婆罗洲的土壤之中分离得到,产生万古霉素的细菌被命名为东方拟无枝酸菌。万古霉素不易产生耐药性的优点被很早发现了出来,于1958年获得了FDA的认可授权Eli Lily公司生产,最早的运用在于耐青霉素的金黄色葡萄球菌的感染,药品商品名为稳可信。
万古霉素通过抑制细菌的生长和繁殖来杀死细菌。这种药物通过干扰细菌细胞壁结构中的关键组分肽聚糖来干扰细胞壁的合成,当然也可以抑制RNA的复制,细胞壁中磷脂和多肽的生成。所以万古霉素还可以用在四个方面的感染治疗:首先是耐药菌感染的治疗;另外也用在难辨梭菌酿成的抗生素耐药性的伪膜性肠炎的治疗。万古霉素还可以用于治疗结肠炎和肠道炎症;万古霉素还经常用于安装心脏导管、静脉导管等装置时的预防感染。可抑制细菌细胞壁的合成,对金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌等作用强,对难辨校状芽孢杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌等作用也良好。与其他抗生素无交叉耐药性,极少耐药菌株。主要用于心内膜炎、败血症、伪膜性肠炎等。
万古霉素对葡萄球菌属包括金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林敏感及耐药株、各种链球菌、肺炎链球菌及肠球菌属等多数革兰阳性菌均有良好抗菌作用。缺乏交叉耐药性,基本无耐药菌株这些特点,让万古霉素成为了重要的抗生素类药品。
但是万古霉素并非广谱抗生素,口服不吸收,难以作为常用手段。口服不吸收,单剂静脉滴注400mg,滴注完毕即达到血药峰浓度(cmax)25.18mg/L, 8小时血浓度平均为1.90mg/L,有效血浓度可维持6~8小时。单次静脉滴注800mg,高峰血浓度平均为50.07mg/L。本品可广泛分布于身体各种组织体液,但不易进入脑组织中,在胆汁中的量亦甚微。静脉滴注后主要经肾脏排泄,单次静滴400mg,24小时尿中平均总排泄率为81.1%;单次静滴800mg,24小时尿中平均总排泄率为85.9%。可出现皮疹、恶心、静脉炎等。本品也可引致耳鸣、听力减退,肾功能损害。个别患者尚可发生一过性周围血象白细胞降低、血清氨基转移酶升高等。快速注射可出现类过敏反应血压降低,甚至心跳骤停,以及喘鸣、呼吸困难、皮疹、上部躯体发红(红颈综合症)、胸背部肌肉痉挛等。
因此,时刻掌握患者体内万古霉素的血药浓度,是十分重要的。在多种方法之中,我们选择了快速又精准的高效液相色谱来进行分析。
研究方法:
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
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