- 研究背景
腹膜透析（PD）是终末期肾病患者的主要替代疗法之一。但长期PD治疗后会导致腹膜纤维化，从而使超滤失败。腹膜间皮细胞是人体腹腔内最大的细胞群,其对维持腹腔内环境的稳定、损伤修复及抵抗炎症反应有重要的作用。
氧化应激是细胞内由于过量ROS产生导致的一种氧化-抗氧化体系失衡的应激损伤状态。正常情况下机体的抗氧化能力与不断产生的氧自由基的氧化能力之间保持着动态平衡,不会引起机体损伤,但传统的腹膜透析液以葡萄糖作为渗透剂,研究发现葡萄糖可诱导多种类型的细胞产生ROS,其中包括腹膜间皮细胞。ROS产生过多,影响抗氧化酶的活性,导致机体损伤。
丹参酮IIA是中药丹参的提取物,也是丹参重要的有效药理成分之一,具有明确的分子结构,在临床使用安全,无明显副作用。且研究发现丹参酮IIA具有抵抗氧化应激、防止低密度脂蛋白氧化损伤、减少氧自由基生成、激活抗氧化应激酶的活性等功能。
腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK，Adenosine monophosphate activated protein kinase）属于 SNF1/AMPK 蛋白家族，是一种在生物中高度保守的蛋白激酶。它是真核生物细胞和组织代谢的主要调控器，在调控生长和重组代谢方面有重要作用，其活性主要受细胞中 AMP/ATP 比值的调节。AMPK 促进分解代谢通路产生更多的 ATP，并抑制合成代谢通路，保证细胞能量的供应。在真核细胞中，AMPK 发挥着协调生长和代谢的一般作用和调控特殊组织（如肝脏、肌肉和脂肪等）代谢的特殊作用。硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)系统是体内重要的氧化还原蛋 白系统，广泛表达于各种细胞，具有抗自由基损伤、抗凋亡和促进细胞生长的功能。TXNIP是 Trx的内源性抑制蛋白，能与Trx结合而妨碍其功能。
- 研究目标
本项目的重要任务是研究丹参酮IIA对腹膜纤维化逆转机制，全面探索丹参酮IIA治疗腹膜纤维化的潜力与可能性。
三、实验内容
1、丹参酮IIA脂质体的制备
采用逆向蒸发法来进行制备。称取卵磷脂 60 mg，豆甾醇 20 mg 溶于 25 mL 二氯甲烷，置于烧杯中。称取12 mg溶于5 mL pH 7.0的PBS缓冲液中，置于圆底烧瓶中，将烧杯中的混合液倒入圆底烧瓶中。冰浴条件下探头超声 10 min（超声时间 2 s，间隔时间 2 s，功率为 100 W），形成均匀乳剂，旋转蒸发除去二氯甲烷，形成胶态后加入 pH=7的PBS缓冲液 20 mL，继续减压蒸发 30 min，冰浴条件下探头超声 10 min（超声时间 2 s，间隔时间 2 s，功率为 100 W），过 0.45 mu;m 微孔滤膜即得。
- 丹参酮IIA脂质体分析方法的建立
用HPLC来进行标准曲线的测定。
3、丹参酮IIA脂质体表征参数的测定
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