开题报告内容:
- 研究背景
肺纤维化是一种肺损伤后较为严重的并发症,发病机制尚未明确 , 其病理特征主要表现为弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱,肺间质细胞外基质蛋白的过度沉积,最终导致气道损伤和呼吸衰竭。近年来肺纤维化发病率逐年升高,且肺纤维化发展到病程后期,药物难以逆转。基于此本实验采用在肺纤维化疾病形成过程中用药干预的方法,探讨药物在肺纤维化病理形成过程中的作用及其机制。
中医将肺纤维化称之为肺萎,其病机与肺燥伤津,肺中虚冷相关,最近又提出 “肺肾阴虚,痰瘀伏络”为特发性肺纤维化的病机。目前认为,特发性肺纤维化发生与发展与免疫异常、环境污染、病毒感染和放射线等有关,这些因素可损伤肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞,引起肺泡巨噬细胞活化,释放大量的细胞因子和炎性递质,在早期肺损伤中起着至关重要的作用,以及巨噬细胞活化后产生的多种致纤维化因子如血小板源生长因子 ( PDGF)、TGF-beta;1等。
目前,中医药对特发性肺纤维化治疗取得了一定的进展,曹芳等观察发现,肺痹汤能明显减轻特发性肺纤维化患者的咳嗽症状。王檀等对中药治疗肺纤维化的机制进行广泛的研究。中药黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根,《中国药典》记载黄芩具有 “清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎之功效”,黄芩苷是一类黄酮类化合物,是黄芩主要药效单体,具有抗菌抗病毒、解热镇痛抗炎、抗肿瘤及对心脑血管有保护作用等。黄芩苷对小鼠肺内流感病毒具有一定的清除作用,可改善小鼠肺组织的病理变化,降低内毒素休克大鼠病死率,减轻肝、肺组织白细胞浸润。此外,黄芩苷可抑制博来霉素诱导肺纤维化大鼠的肺内出现 CTGF 表达的上调,同时可减少糖尿病肾病大鼠肾组织中 TGF-beta;1 的含量。中药的多靶点、低毒性的特性使其在治疗肺纤维化方面具有一定价值,但是对于中药主要作用成分及其作用机理需要进一步阐明。我们前面的研究已经证明中药提取物TS有一定的镇咳祛痰、抗炎等药理学活性,因此,本课题在前期研究基础上通过气管内注射博来霉素建立大鼠肺纤维化模型,使用中药提取物TS进行干预,研究中药提取物TS对博来霉素致大鼠肺纤维化症状的改善情况。
二、研究内容
1. 实验动物与分组:成年SD大鼠,适应性喂养 7 d 后,随机分为5组: 假手术组、特发性肺纤维化模型组、TS高剂量组、TS低剂量组、吡非尼酮对照组。具体分组方法为:雌雄分别分组,分组方法相同。以雄性动物为例,称大鼠体重,将体重不同的大鼠分开(如200g的大鼠放一笼,195g的大鼠放一笼hellip;hellip;依次类推,直至体重最轻的一笼)。取5只鼠笼用于分组,从体重高-低,依次每笼安排大鼠,第一轮:从第1个鼠笼开始放直到第8笼;第二轮:从第2个鼠笼开始放直到第8笼,并将第1个鼠笼补齐1只大鼠;第三轮:从第3个鼠笼开始放直到第8笼,并将第1、2个鼠笼补齐2只大鼠;第四轮:从第4个鼠笼开始放直到第8笼,并将第1、2、3个鼠笼补齐3只大鼠;第5轮:从第5个鼠笼开始放直到第8笼,并将第1、2、3、4个鼠笼补齐4只大鼠hellip;hellip;依次类推将所有大鼠分完为止,每一笼有6只雄性大鼠。雌性大鼠同理分成5组,每组6只。
2. 造模与给药:采用气管内滴入博莱霉素的方式建立肺纤维化模型。大鼠麻醉后,仰卧固定于手术台上,暴露气管。由气管软骨环间隙,向气管内滴注博莱霉素(5mg/kg)生理盐水溶液,假手术组给予等体积生理盐水,迅速直立大鼠并旋转,使药物均匀分散。假手术组向气管内滴注生理盐水。待大鼠恢复正常后(约5天)开始给药,连续28天。
3. 观察指标:
(1)一般情况观察:每天观察大鼠的活动度、对外界反应的灵敏度、皮毛光泽、口唇鼻毛色泽、体重、饮食、呼吸、死亡等情况。
(2)肺脏器系数、肺干湿重比测定
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