硫熏天麻标志物的制备文献综述

 2022-12-28 09:41:32

文献综述
1.1硫熏天麻的原理及优缺点
很多药材含有比较多的水分，并且由于组织以及结构的特征较难干燥，古人就创立了用硫磺熏蒸的方法来干燥和处理药材。其实不仅仅是起到了干燥的作用，与此同时也可以一定程度上起到漂白（亚硫酸的还原显色物质的作用）药材和药材防腐（亚硫酸可以消耗氧避免了很多微生物滋生所需要的环境）的作用。但是在经过硫熏炮制处理之后，往往会造成过多的二氧化硫残留，并且硫磺里面往往也含有部分重金属物质也会渗入药材，都会对使用者的身体造成较大的伤害。且对于药材本身而言，硫磺熏蒸也会较大的影响饮片的颜色、质地、PH、气味等。[1]在天麻进行硫磺熏蒸的过程中最为重要的是，天麻中的许多活性成分、指标性成分会受到较大影响，往往会伴随着物质间的相互转化（主要是其中的酚类成分的含量发生变化，比如苷的水解成苷元以及部分酯化反应等），从而影响疗效。[2]~[3]
1.2硫熏天麻的主要成分以及相关药理作用和功效
天麻主产地为云贵川等地区。天麻主要含有酚类，多糖类和有机酸类。学者王莉等人[4]利用大孔树脂乙醇水梯度洗脱的分离手段结合核磁和质谱的鉴定手段，对天麻中的极性部位进行了结构鉴定方面的工作。学者王亚威[5]结合硅胶柱色谱和制备液相色谱对样品组分进行分离纯化，并通过核磁和光谱的鉴定手段进行了分析，也验证了天麻素等结构并解析了一系列酯类、醚类、醛类化合物。天麻经分离鉴定里面含有的主要活性物质有天麻素，其苷元：对羟基苯甲醇，巴利森苷，腺苷等。主要药理作用：天麻素具有一定的增强免疫（天麻多糖）、镇静催眠（天麻素）、降血压（天麻多糖）、镇痛（天麻素）、抗癫痫（天麻素）、改善记忆和益智作用（天麻素）。天麻被广泛应用于一些中成药的制剂当中，例如：天麻片、天麻丸等。[6]与此同时，针对性的对于硫熏天麻可能产生的不良药理作用，学者康传志[7]考察分析了硫熏天麻标志物和其水提取物的细胞毒性（实验对象为：人肝细胞、大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞），实验结果表明，在正常的浓度范围内，其不会对细胞活力产生显著影响。

1.3相关定性定量鉴别
最新版药典将以下物质作为天麻薄层色谱定性鉴别的一些鉴别项：天麻苷元（对羟基苯甲醇）、巴利森苷、天麻素。结果应在与对照品以及对照药材色谱的相应位置，有相同颜色的荧光斑点。
至于含量测定方面，规定使用一测多评法，将价格便宜的天麻素作为内参，建立了同时测定巴利森苷、巴利森苷B、C、E以及天麻素和其苷元六种成分的方法。与此同时，规定了他们的含量限度。酚和酚苷类成分不得低于0.25%，柠檬酸酯类成分成分不能低于1.0%。
1.4硫熏天麻标志物的产生以及相关性质和测定结果
1.4.1硫熏前后相关物质的转化
学者康传志利用了超高效液相色谱结合四极杆飞行时间质谱，建立了一套实用的硫磺熏蒸标志物的鉴定和相关评估方法并分析了其转化机理。实验结果表明在反相色谱图中该标志物第一个出峰，并且经质谱鉴定该物质的分子量为187，并通过相应谱图分析得到其分子式为C7H8O4S。其采用了代谢组学和多元统计分析方法相结合的手段，结果表明了硫磺熏蒸的1-2h中积累的含硫组分（对羟基苄基亚硫酸酯）与活性酚类物质成正相关。另外也确定了二氧化硫的最大残留限度为750mg/kg。即，1：40的比例硫磺熏蒸一小时预处理是一种安全有效的中药保藏方法。[8]

1.4.2该标志物的相关性质
同时，康传志在他的另一篇文章（硫熏天麻标志物定性定量分析及稳定性研究）中对样品处理方法（贮藏时间、加热温度、加热时间）进行了评估，结果表明：在达到八个月的储存时间内，该标志物仍有较好的稳定性并且在加热温度小于等于80度，加热时间小于等于24小时的时候，该标志物成分仍然保持稳定，不会出现降解氧化等变化。该研究结果也有力地表明了该标志物可以作为硫熏天麻的质量评估的内容。[9]
1.4.3相关测定
研究者靳灿灿的实验结果表明：和没有进行硫磺熏蒸处理的天麻样品相比较而言硫熏之后的天麻的酚类物质的含量均有一定程度的降低，其中天麻素含量明显降低。且对比不同组别的实验结果，推测出该炮制处理会影响天麻素和巴利森苷的水解作用。说明硫熏天麻会一定程度影响其有效成分，在处理的过程中应该严格把控各项工艺参数。
1.5.该标志物的制备方法的讨论
1.5.1提取
提取大致包括的内容有：提取温度，提取时间和提取溶剂以及提取方式，对此，我大致总结了几篇针对天麻的提取研究的比较全面的文献，并比较异同，再通过预实验大致决定最终的样品提取方法。南中医的学者倪昌荣[10]针对活性成分比较多的天麻饮片的提取方法做了相关研究。该实验中对多个因素（提取时间、提取溶剂、提取次数、料液比）进行单因素考察，之后使用正交试验选出了最优的提取方式是：用水作为溶剂，料液比是1：6，回流三次（80min/次）。华中科技大学的赵佳鑫[11]除讨论上述参数外还讨论比较了不同提取方式（超声和回流）的提取效率。并且她利用三维曲面图和响应面法综合对比分析了这些因素之间的权重，最终她得出最佳提取条件：利用65%乙醇90℃回流90分钟，提取一次，料液比1：6。但是这些实验结果都是基于除硫熏标志物之外的物质的提取效率讨论，具体还是需要通过预实验来确定。目前大致可以确定料液比1：6，提取溶剂为甲醇或者乙醇溶液，提取方式为超声或者回流。

1.5.2分离纯化

目前总结的分离方式：（1）色谱制备分离—需要不断考察并不断调整液相的色谱条件（进样量，柱子类型，流动相类型及配比，流速，柱温等）以达到目的峰在预计保留时间出峰，并且分离度较好。可参考彭礼军[12]等人用制备型液相色谱进行分离和制备天麻素的研究。他的实验思路是先通过分析型液相摸条件然后将得到的色谱条件进行放大，运用到制备色谱并进行优化调整，对天麻素进行了纯化。（2）通过大孔树脂或者柱层析的方式进行分离制备，洗脱液结合TLC或者HPLC进行检测以确定洗脱液是否合适，以及做出相应的调整，使洗脱液尽可能不断纯化。昆明理工大学的程桂广[13]等人使用了一种将大孔树脂（不同浓度的乙醇溶液梯度洗脱）粗分和硅胶柱层析细分（石油醚—丙酮梯度洗脱）这两种分离方式相结合的分离手段，得到了天麻素苷元（对羟基苯甲醇）的粗品，然后又通过萃取和重结晶进行处理，得到了纯度较高的天麻素苷元。该方法操作简便，污染及损耗较低。且分离思路合理得到产品纯度高，可学习采纳提取分离部分的部分处理思路。另外考虑到结构的相似性以及极性的接近程度。我参考了秦宏伟[14]的对于翻白草的成分提取分离鉴定的研究。他里面的一个成分对羟基苯甲酸，在乙酸乙酯的提取部位，他先用100～200目的硅胶柱进行粗分，然后又将目的流分上200～300目硅胶进行细分（石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱）得到目的产物—对羟基苯甲酸。（设计大致过程：提取—提取液萃取（乙酸乙酯或者正丁醇）—提取液旋蒸浓缩成浸膏—干法上样过柱子，使用洗脱液二氯甲烷-甲醇：100：1-100：2-100：3-100：4-100：5-100：10-10：1-5：1-1：1梯度洗脱）。在设计实验的时候为了流程的规范性和合理性，也参照了学者刘延杰[15]的关于利用柱层析分离分析天然产物的一篇文章，里面从样品的制备，装柱，点样，洗脱到流分合并与检测都很详实而且分析到位。

[1]蒋以号,刘伟,曹晖,于留荣.中药硫磺薰蒸研究概况[J].中国医药指南,2010,8(33):38-40.

[2]靳灿灿,李会军.硫磺熏蒸对天麻有效成分的影响[J].中成药,2014,36(08):1706-1710.

[3]赵四清,曾嵘,雷鹏,谢云龙.熏硫加工对天麻饮片汤剂质量的影响[J].湖南中医学院学报,2005(02):25-37.
[4]王莉,肖红斌,梁鑫淼.天麻化学成分研究(Ⅰ)[J].中草药,2003(07):11-12.

[5]王亚威,李志峰,何明珍,冯育林,王琦,李翔,杨世林.天麻化学成分研究[J].中草药,2013,44(21):2974-2976.

[6]安中原,钟斌. 天麻的化学成分与药理活性研究概况[J]. 海峡药学,2017,29(06):22-24.

[7]康传志,吕朝耕,王红阳,王升,王铁霖,孙嘉惠,万修福,周利,郭兰萍.天麻硫熏标志物和硫熏药材水提物的细胞毒性评价[J].世界中医药,2019,14(11):2840-2844.

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