开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
(一) 研究目的:
病毒性呼吸道疾病是目前国内外流行的主要传染病。由于各种疫苗的不断出现,一些病毒性疾病已得到了有效抑制,但是病毒性呼吸道疾病的治疗尚无有效的解决办法。病毒性流感性感冒(流感)每年都在全世界流行,波及范围广,照成经济损失之大位于传染病之首。目前广泛使用的灭活流感疫苗在同型免疫的情况下对健康成年人的保护率可达80%-90%,但是这种疫苗有很多不足之处:(1)接种率低,仅为5%-10%;(2)对儿童和老年人的保护率仅为40%-60%;(3)流感病毒具有易发生抗原变异的生物学特性,每10-20年就会有新的突变株造成世界性大流感,所生产的疫苗很难与将要流行的病毒株抗原性一致,而新疫苗又需要6个月以上。
流行性感冒病毒,简称流感病毒,是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒,属于正黏液病毒科,它会造成急性上呼吸道感染,并借由空气迅速的传播,在世界各地常会有周期性的大流行。
现代药理学表明,许多中草药及其多种成分都有很好的抗病毒作用,且具有作用独特、抗病毒谱广、毒副作用小、疗效显著等优点,证日益成为抗病毒新药研究的热点。黄芩苷是黄芩素在体内的代谢物。黄芩素是从中药黄芩根部提取出的一种黄酮类有效成为,表现出多种生物学活性。实验室前期研究表明,口服黄芩素能有效的抑制流感病毒在小鼠体内的增殖,而这种一致作用与她在体内的代谢产物黄芩苷有关。
本实验选用选用流感鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)简历MDCK细胞感染模型,从体外考察黄芩苷对其抑制作用,从而完成黄芩苷对流感病毒感染的抑制作用的初步研究。
(二)研究内容和方法
1.病毒对MDCK细胞TCID50测定
MDCK细胞按5*104/ml浓度接种96孔培养板,每孔100ul,置于37C 、5% CO2培养箱中培养24h形成细胞单层。用PBS将细胞洗涤2次后,彻底洗去残余的胎牛血清,用DMEM将流感病毒以10倍梯度稀释成10个浓度,分为感染96孔板中的单层细胞,每个浓度接种4个复孔,置37C 、5% CO2培养48h,在倒置显微镜下观察细胞病变,按Reed-Muench法,计算病毒半数细胞感染量(TCID50)。
2.黄芩苷对MDCK细胞毒性测定
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