抗炎活性化合物的筛选和发现研究文献综述

 2023-02-13 22:33:42

一、拟研究或解决的问题炎症及过度免疫是自身免疫疾病的主要表现，也是导致多种重大慢性疾病的重要原因，传统的抗炎及免疫抑制药物虽然有良好的药理活性，但多因其引发的广泛的毒副作用而应用受到限制。

因此，具有更显著抗炎及免疫抑制活性且毒性更小或近似无毒的新型药物的研发成为当今医药学领域最热门的课题之一。

本课题拟运用细胞分子水平的筛选方法，进行抗炎及免疫抑制活性化合物的发现研究，以期能获得具有抗炎及免疫抑制作用而对机体毒副作用较小的新型活性化合物。

二、研究手段（一） 抗炎及免疫抑制活性化合物筛选平台的建立1. 免疫抑制活性化合物筛选平台的建立脾脏是机体最大的免疫器官，含有大量的T、B淋巴细胞，在体外施加脂多糖(LPS)和刀豆蛋白A(ConA)可以分别刺激B淋巴细胞活化增殖和T淋巴细胞活化增殖，模拟机体免疫活化的状态。

因此可制备小鼠脾脏单细胞悬液，通过ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞增殖，检测化合物对T、B淋巴细胞增殖的抑制作用，初步评价化合物的免疫抑制活性。

2. 抗炎活性化合物筛选平台的建立RAW264.7细胞是小鼠腹腔来源的巨噬细胞，用LPS等致炎介质刺激，促使细胞分泌肿瘤坏死因子（TNF-alpha;）等炎性细胞因子。

检测化合物对炎症因子的水平的影响，即可初步反映化合物的抗炎活性。

（二）抗炎及免疫抑制活性化合物的筛选1. Cell Counting Kit-8(CCK8)检测化合物毒性CCK8试剂中含有WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，可在活细胞内脱氢酶作用下，经历一系列氧化还原反应，生成橙黄色甲臜(Formazan)染料。

甲臜染料可溶于培养液中，生成的甲臜数量与活细胞的数量成正比，且在460nm处有最大吸收，因此用酶标仪读取加入CCK8试剂后96孔板（预先加入细胞、培养液和化合物并已培养24h）各孔的OD值，即可计算出化合物作用下细胞存活的比例，进而比较不同化合物对细胞的毒性作用大小。

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