CRISPR-Cas9 Mediated Chromosome Labeling文献综述

 2023-02-15 18:18:41

开题报告拟研究问题： 染色体的空间结构和动态变化在调控基因表达中发挥着重要作用，但是我们缺乏在活细胞观察特定基因位点分布的方法。

我能希望利用CRISPR-Cas9系统能靶向特定DNA序列的特性，在特定的基因位点实现富集荧光信号，从而在活细胞内用荧光标记出特定的基因位点。

以用于基因的动态追踪和观察。

研究方法：1. 构建表达质粒：PCR扩增、限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳、割胶回收、DNA纯化、T4连接、感受态细胞转化、挑单克隆、质粒抽提。

2. 细胞实验：细胞复苏、培养和脂质体转染细胞。

3. 拍照：共聚焦显微镜拍照。

文献综述及研究内容：确定基因在染色体上的位置，追踪特定序列位点的动态变化，在研究基因组功能过程中起到至关重要的作用。

一般情况下，特异性染色体定位的细胞标记方法依赖于原位杂交，包括DNA荧光原位杂交（DNA-FISH）。

DNA-FISH虽然能准确高效的的靶向到染色体的特殊位点，显示出间期或者分裂时期细胞核内与探针相对应基因的位置，但只能应用于固定的细胞样本。

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