一,本课题研究的目的:1.FGFR=Fibroblast growth factor receptor[医] 纤维母细胞生长因子受体;DSH[医][=dead space heparine] 肝素(作用)死腔。
肿瘤(tumor,neoplasm)是一种基因病,但并非是遗传的。
它是指细胞在致瘤因素作用下,基因发生了改变,失去对其生长的正常调控,导致异常增生。
细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
通过基于FGFR的DSH促进肿瘤细胞凋亡的相关研究,来给肿瘤治疗带来新的思路和方法。
二,实验方案2.13位硫酸化肝素衍生物药效活性研究实验方案2.1.1 PCR和WB验证HePG2,HELF,bel 7402,MCF-7,Bac-823,a549,HK-2,HCT116,95D等细胞中3-OST-1的表达量PCR:1、培养箱中取出汇合度为70%~80%的细胞,将旧的培养基倒去,加入胰酶1ml,轻轻荡洗瓶底,将死细胞及其一些细胞代谢物除去,然后倒去胰酶;2、再向培养瓶内加入2ml胰酶,并放入CO2箱中消化3min,拿出后显微镜观察细胞的形态变化,发现细胞质固缩,细胞间隙增大后,立即停止消化;3、加入10%小牛血清DMEM低糖培养基1ml终止胰酶消化,吹打多次,将细胞从培养瓶壁上消化下来;4、 将培养瓶内的细胞悬液加入离心管内,1000rpm,离心5min,弃上清;5、加入10%小牛血清DMEM低糖培养基2ml于离心管重悬细胞,用滴管将细胞吹打均匀;6、细胞悬液用血球计数板计数之后,稀释至10万/ml,6孔板每孔均匀加入稀释后的细胞悬液2ml;7、细胞培养贴壁后,生长至每孔细胞量达到80%~90%后弃去培养基。
8、mRNA总提及cDNA逆转录实验:9、PCR琼脂糖凝胶电泳WB:1、细胞培养步骤同前;2、细胞培养后,分组提取细胞总蛋白:小心弃去细胞板中的培养基。
用预冷的PBS清洗2-3次,弃去PBS。
加入蛋白提取液,每孔150mu;l,4℃震荡30min,14000rpm离心10mim。
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