MG53抑制心纤维化分子机制研究文献综述

 2022-12-17 18:57:09

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、课题背景

心脏纤维化是病变心脏重要的结构重构表现，心纤维细胞的活化，增殖，引起心脏电传导速度改变，电离散度增加，成纤维细胞分泌的细胞因子，不仅可以促成纤维细胞增殖，活化，还可以直接影响心肌细胞离子通道功能，是心肌病变进展的重要推动因素。心成纤维细胞活化机制尚未清除。MG53是横纹肌细胞特有的蛋白，文献资料显示，此蛋白对肺纤维化有作用，对心脏纤维化的影响尚未有文献报道。本项目采用TFG-beta;1诱发心纤维化，观察MG53对心成纤维细胞活化，增殖的影响，在整体和细胞水平探讨MG53对心脏纤维化的作用及机制。

  1. 要解决的问题

在整体和细胞水平探讨MG53对心脏纤维化的作用及机制，为MG53对心肌纤维化治疗作用研究做准备。

  1. 可行性分析

实验整体可行性良好，设备齐全，主要限制是MG53蛋白价格昂贵，分子水平研究受限。

  1. 研究方法和内容
  2. 研究方法：文献研究法、模型法、实验法、观察法等
  3. 内容

2.1动物实验（整体水平的研究）

成年SD大鼠，雄性，180-250g。设五组，分别是空白对照组、TGF-beta;1组、TGF-beta;1加黄芪甲苷组、异丙肾上腺组和异丙肾上腺素加黄芪甲苷组。空白对照组：8只；尾静脉注射生理盐水，注射剂量为0.15ml/100g，隔天一次共十天；从给药第五天开始，同时给予0.5%的CMC-Na灌胃，灌胃量为0.2ml/100g，每天一次共六天。TGF-beta;1组：8只；尾静脉注射TGF-beta;1，给药量为1.5mu;g/kg（注射剂量为0.15ml/100g），隔天一次共十天。TGF-beta;1加黄芪甲苷组：8只；尾静脉注射TGF-beta;1，给药量为1.5mu;g/kg（注射剂量为0.15ml/100g），隔天一次共十天；从给药第五天开始，同时给予黄芪甲苷，给药量为10mg/kg（灌胃量为0.2ml/100g），每天一次共六天。异丙肾上腺素组：10只；皮下注射异丙肾上腺素，给药量为5mg/kg（注射量为0.1ml/100g），每天一次共十天。（注：本次实验前5天给药量为2.5mg/kg，一天两次，间隔六小时）。异丙肾上腺素加黄芪甲苷组：10只；皮下注射异丙肾上腺素，给药量为5mg/kg（注射量为0.1ml/100g），每天一次共十天。（注：本次实验前5天给药量为2.5mg/kg，一天两次，间隔六小时）；从给药第五天开始，同时给予黄芪甲苷，给药量为10mg/kg（灌胃量为0.2ml/100g），每天一次共六天。

分别在实验开始第一天、第五天和第十一天，共三次测心电图、取血（3500r 5min离心后取上清于-20℃冻存）。在第十一天处死，冲尽脏器内的血液后，取心脏、肝、肺、肾，称重每个脏器称重后取部分放福尔马林中保存，其余放-80℃冻存。

Masson染色：取保存在福尔马林中的组织，固定、切片、染色后观察纤维化情况；HYP检测：取冻存组织80-100mg，测羟脯氨酸含量；PCR：取冻存组织50-80mg，提取mRNA定量后逆转录、扩增，检测组织中MG53及纤维化因子（alpha;-SMA、FN、Collagen 1）表达情况。Western-blot：取冻存组织提蛋白后，测定组织中MG53的含量。

2.2 细胞水平研究

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