内皮源性ZEB1抑制骨生成作用及初步机制研究文献综述

 2022-12-24 13:33:28

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

拟研究或解决的问题：

骨质疏松症(osteoporosis，OP)是由骨密度降低，骨组织脆性增加、骨强度减低，而使骨折风险增高的全身性骨病。随着 OP 发生率的逐年提高，特别是老年人及绝经后的妇女发病率高达50%以上，OP已经成为全球性的公共卫生问题。不但增加了个人的痛苦，还给家庭和社会增加了经济负担。

骨质疏松症初期通常没有明显的临床表现，因而被称为“寂静的疾病”或“静悄悄的流行病”。但随着病情进展，骨量不断丢失，骨微结构破坏患者会出现骨痛脊柱变形甚至发生骨质疏松性骨折等后果，部分患者可没有临床症状，仅在发生骨质疏松性骨折等严重并发症后才被诊断为骨质疏松症。

目前，临床上常用于治疗骨质疏松症的药物有：雌激素、PTH及其类似物、降钙素、组织蛋白酶K抑制剂、c-Src 激酶抑制剂、硬化蛋白抗体。但是多有不同程度的副作用，如激素类药物，长时间使用会增加乳腺癌、子宫癌的风险，降钙素长时间使用会有恶心、呕吐、低血钙等不良反应；临床上常用的药物狄诺塞麦长时间的使用也会破坏骨重建过程，影响骨骼功能。 这些个不良反应限制了这些药物的更长时间、更广泛的应用。因此有必要寻找新的针对各个靶点的治疗药物，或者寻找到其他的更安全更有效的代替药物，能够更有效地维持骨重建的动态平衡，使之成为治疗骨质疏松症的更有效的方法。

研究手段：

  1. 构建内皮特异性敲除zeb1基因的转基因鼠模型：将zeb1fl/f1转基因小鼠与表达tie2-cre重组酶的小鼠连续交配，获得tie2-cre /zeb1fl/fl条件性敲除子代小鼠，该小鼠体内zeb1基因只在tie2-cre 内皮细胞中被特异性敲除。
  2. 免疫荧光染色分析：它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。
  3. HE染色：骨组织固定并脱钙脱水后，石蜡包被、切片。石蜡切片在二甲苯中脱蜡，梯度酒精脱水，苏木精染核2-3分钟，自来水洗涤，浸入伊红染色1分钟，自来水洗涤，吹干后封片。细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
  4. 免疫荧光：骨组织固定后迅速脱钙脱水后，OTC包埋，冰冻切片，血清封闭、一抗孵育4度过夜、荧光二抗常温孵育一小时后，用含dapi的封片液封片，激光共聚焦显微镜下观察。石蜡包埋切片脱蜡并用抗原处理石蜡包埋切片脱蜡并用抗原处理
  5. 定量逆转录PCR：由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。可以用于定量监测某种RNA的含量
  6. 流式细胞术：工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。

文献综述：

随着全球人口的老龄化,骨质疏松症（osteoporosis,OP）的发生率逐年升高,骨质疏松症是最常见的骨骼疾病是一种以骨量低，骨组织微结构损坏，导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的全身性骨病。[1]目前骨质疏松症已成为全球关注的老年性疾病之一,流行病学资料调查显示,骨质疏松症患者发生脆性骨折的风险高达40%,中国目前已经成为世界上老年人口最多的国家,随着预期寿命的延长,骨质疏松症的发生率也呈逐渐上升趋势。因此,深入研究骨质疏松症的发病机制,明确其关键致病基因、寻找新型药物的治疗靶点对于骨质疏松症的早期诊断、治疗及新药研发均具有重要的研究意义。

在分子生物学上，OP 的发病机制主要受到遗传基因、转录因子、信号通路、激素水平、细胞因子等多因素调控。骨重建是骨形成和骨吸收保持动态平衡的过程。目前，临床上常用于治疗骨质疏松症的药物有：雌激素、PTH及其类似物、降钙素、组织蛋白酶 K 抑制剂、 c-Src 激酶抑制剂、硬化蛋白抗体。但是多有不同程度的副作用，如激素类药物，长时间使用会增加乳腺癌、子宫癌的风险，降钙素长时间使用会有恶心、呕吐、低血钙等不良反应；临床上常用的药物狄诺塞麦长时间的使用也会破坏骨重建过程，影响骨骼功能。[2]

Wnt/beta;-catenin、ＲANKL/ＲANK/OPG 等通路是参与骨代谢调节的重要通路，也是各类抗骨质疏松药物的作用靶点。目前骨质疏松的治疗药物通过作用于这些通路的关键靶点，调节成骨细胞和 /或破骨细胞分化、成熟及其功能，发挥促进骨形成、抑制骨吸收的作用。[3]

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