开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、实验背景
肺癌是中国乃至全世界最常见的恶性肿瘤以及首位的癌症死亡原因。根据世界癌症研究机构(IARC)的数据统计,以2012年为例,全球肺癌新发病例约182.5万例,死亡病例约159.0万例,我国肺癌新发病例约65.3万例,死亡病例约59.7万例,是危害居民生命健康的最主要的恶性肿瘤。随着我国工业化、城市化进程的进一步加速所导致的空气污染以及吸烟率的居高不下,肺癌的危害将继续加剧。而且无可置疑的是肺癌是最难治的肿瘤之一,由于各种原因我国的肺癌患者确诊时多已较晚期,因此也是目前预后最差的肿瘤之一。如果将所有期别,所有类型的肺癌都放在一起看的话,肺癌1年生存率仅仅20%,5年生存率仅仅6%,能手术切除的患者5年生存率也仅仅20%。
黄酮类化合物是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮结构的化合物。而大多数黄酮类化合物都有一定的抗肿瘤作用,其机制也各不相同:如槲皮素的抗肿瘤活性与其抗氧化作用、抑制相关酶的活性、降低肿瘤细胞耐药性、诱导肿瘤细胞凋亡及雌激素样作用等有关;水飞蓟素的抗肿瘤活性与其抗氧化作用、抑制相关酶活性、诱导细胞周期阻滞等有关。之前的研究表明黄酮类化合物FV-429对于人肝癌和胃癌细胞具有显著的抑制增殖作用,可以诱导人肺癌A549细胞发生凋亡,本课题主要研究FV-429诱导人肺癌A549细胞凋亡在作用机制。
二、实验目的和意义
肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病。然而,传统治疗肿瘤的药物多是一些细胞毒性药物,无选择性,对正常组织毒性较大。同时单基因靶点靶向性药物的耐药性等使肿瘤的治疗也并不乐观。本课题旨在通过体内和体外实验研究,探讨黄酮类化合物FV-429诱导人肺癌细胞凋亡可能的分子机制,研究FV-429对人肺癌细胞的有氧糖酵解、氧化磷酸化及脂肪酸代谢的调节,为进一步研究针对人肺癌抗肿瘤药物提供前期研究基础。
三、研究内容
实验大致可分为体外培养的肿瘤细胞实验和动物移植瘤模型实验两部分,实验中以不同给药浓度以及给药时间等作变量,通过Western blot实验、荧光免疫、免疫组化等方法寻找黄酮类化合物FV-429可能的诱导人肺癌A549细胞凋亡的靶点,也可以通过MTT实验和克隆形成实验等直观表现该化合物对肿瘤细胞生长周期的影响。。
四、研究手段
1、MTT 实验:利用MTT法检测细胞生长的速率。接种2000-3000个细胞至96孔板中,每天或隔天检测细胞生长情况。在检测之前,在每个待检测孔中加入20mu;l MTT溶液(5mg/ml MTT溶解于PBS中),37℃孵育4h后,吸弃培养液,加入150mu;lDMSO溶解紫色结晶物。在酶联免疫检测仪在490 nm 波长下测定其光吸收值。
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