开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题的研究背景、意义和目的
肿瘤免疫治疗是寄希望于刺激患者自身的免疫系统清除肿瘤的过程，具有较高的疗效和安全性，是目前全球肿瘤治疗研究的热点[1]。肿瘤免疫治疗有多种治疗策略，其中以单抗为代表的肿瘤免疫治疗药物已在临床取得了巨大成功。从1997年首个抗肿瘤抗体药物Rituximab上市，已超过有30个抗肿瘤单抗药物被FDA批准上市。然而，随着这些药物在临床上的广泛应用，抗体药物的一些问题也逐渐暴露出来。如以 HER2 为靶点的 Trastuzumab 等抗体药物，在临床治疗中出现了耐药性和高复发的问题[2]。以Nivolumab和 Pembrolizumab为代表的抗 PD-1 抗体药物，其有效率在除黑色素瘤以外的实体肿瘤中不超过30%[3]。因此，急需要开发出更好的免疫治疗方法，而肿瘤疫苗安全性高、疗效持续时间久、病人依从性好，可能将成为今后肿瘤免疫治疗研究的热点。M7824（MSB0011359C），一种用于晚期实体瘤治疗的靶向PD-L1和TGFbeta;的融合蛋白疫苗已经被批准开展临床I期试验[4]。理想的肿瘤疫苗需要诱导具有细胞裂解能力及产生细胞因子的肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的扩增和功能分化[5]，在肿瘤疫苗设计中，泛DR辅助T细胞表位（pan-DR helper T cell epitopes, PADRE）以高亲和力与人群常见HLA-DR分子结合，较少受MHC限制性的优势被广泛用于表位肽肿瘤疫苗的开发。然而，肿瘤细胞源于自体组织，虽然存在肿瘤特异性突变基因的表达，但由于肿瘤组织形成了一套完善的免疫耐受机制，因此很少被识别为非自体并被免疫系统消灭[6]。所以，在肿瘤疫苗的开发过程中如何打破免疫耐受是一个必须解决的问题。2004年美国Peter G. Schultza实验室提出的一种蛋白质定点突变的技术遗传密码扩充技术，通过模拟天然蛋白质的合成过程，直接表达出含非天然氨基酸的蛋白质[7]。将对硝基苯丙氨酸定点引入目的蛋白，提供了一个简单而且有效的打破免疫耐受的方法[8]。
因此，我们将课题组前期已经设计构建的含有免疫原性氨基酸PADRE表位的人源PD-L1、HER2疫苗分子进行表达、纯化确定最佳的表达纯化路径，并对目的蛋白进行富集。之后在重度免疫缺陷小鼠中重建人免疫系统，建立人源疫苗的体内免疫原性评价模型，并进行免疫原性研究，通过ELISA测定抗体滴度、ATCC、CTL测定杀伤效应。
参考文献
[1] Couzin-Frankel J.Cancer immunotherapy［J］.Science， 2013，342( 6165) : 1432-1433.
[2] Hodi F S, ODay S J, Mcdermott D F, et al. Improved Survival with Ipilimumab in Patients with Metastatic Melanoma[J]. New England Journal of Medicine, 2010, 363(8):711-23.
[3]Topalian S L, Taube J M, Anders R A, et al. Mechanism-driven biomarkers to guide immune checkpoint blockade in cancer therapy[J]. Nature Reviews Cancer, 2016, 16(5):275-87.
[4] Strauss J, Heery C, Schlom J, et al. Phase 1 trial of M7824 (MSB0011359C), a bifunctional fusion protein targeting PD-L1 and TGF-beta;, in advanced solid tumors.[J]. Clinical Cancer Research An Official Journal of the American Association for Cancer Research, 2018:clincanres.2653.2017,1287-1295.
[5] Efferson C L, Schickli J, Ko B K, et al. Efferson C L , Schickli J , Ko B K , et al. Activation of Tumor Antigen-Specific Cytotoxic T Lymphocytes (CTLs) by Human Dendritic Cells Infected with an Attenuated Influenza A Virus Expressing a CTL Epitope Derived from the HER-2/neu Proto-Oncogene[J]. Journal of Virology, 2003, 77(13):7411-7424.
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