成纤维细胞生长因子21的表达,纯化及其神经保护作用的初步研究文献综述

 2023-02-16 18:48:31

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、课题的研究背景、意义和目的

成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)是一类由FGF基因家族编码的蛋白质,庞大的FGF家族成员作为细胞间的多功能信号分子,调节着生物体的多种生理功能,如促进胚胎形成、血管生成、参与创伤修复、内分泌功能调节等。其中,以FGF21为代表的FGF亚家族成员已成为目前糖脂代谢研究的热点。

FGF21是FGF家族的一名新成员,其氨基酸序列与其他亚家族成员之间有较高程度的同源性。目前,FGF21是其家族中发现的唯一没有促有丝分裂活性蛋白,且仅在机体代谢异常时发挥代谢调节作用,大大降低了其临床用药的风险。与经典FGFs家族成员不同,FGF21与其相应受体结合亲和力较低,因此不能与成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growthfactor receptors,FGFRs)直接结合,必须依赖C末端与单跨膜蛋白辅助受体beta;-Klotho结合以及beta;-Klotho与FGFRs间的相互作用,使FGF21与FGFRs结合并磷酸化FGFRs,激活的 FGFRs介导相关信号通路,完成相应的特异性功能。

近年来,FGF21在中枢神经系统中的生物学功能越来越引人瞩目。研究表明,FGF21及其相应受体在大脑中广泛表达,尤其是在黑质、纹状体、海马、皮质等中脑区域。并且,除本身表达外,FGF21还可以通过血脑屏障进入大脑,这提示FGF21可能在中枢神经系统发挥着一定的生物学作用。因此本课题拟用课题组前期已构建的工程菌对FGF21进行原核表达并分离纯化;同时建立Abeta;25-35致SH-SY5Y细胞损伤模型,以此模型为基础初步研究FGF21的神经保护作用,为防治AD药物研发提供新的思路。

二、课题研究的主要内容

1.FGF21的表达纯化

1.1FGF21的表达

按1%的比例将菌液接于含氨苄青霉素(100mu;g/mL)的LB培养基中,37℃、220rpm培养。当OD600达到0.6时,加入IPTG至终浓度为1mmol/L,诱导表达4h,4℃、8000rpm离心10min收集菌体。

1.2FGF21的纯化

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